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CHOgro®高產量表達系統
（試劑盒包括：CHOgro®表達培養基（2 x 1 L），CHOgro®復合物形成溶液（100 ml），L-谷氨酰胺（100 ml），泊洛沙姆188溶液（100 ml），Trans IT- PRO®轉染試劑（1毫升），CHOgro®滴度增強劑（20毫升））CHOgro®轉染和滴度增強試劑盒
（試劑盒包括：反式 IT-PRO®轉染試劑（1ml）中，CHOgro®滴度增強（20毫升））CHOgro®表達培養基CHOgro®復合物形成解決方案泊洛沙姆188溶液，10％L-谷氨酰胺溶液，200 mM跨 IT-PRO®轉染試劑
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先生62701套
選擇的目錄號：MIR 6270
NEW CHOgro®高產表達系統對于高產量的蛋白質生產中懸浮的CHO細胞上的和具有成本效益的瞬時轉染系統。我們的第二代系統具有CHOgro®滴度增強劑，可提供業界的快速蛋白質產量。
使用多種抗體構建體的CHOgro®高產量表達系統優于ExpiCHO表達系統。 六個不同的IgG1抗體構建體，包括在相同的載體骨架合成的5個治療相關的構建體通過使用瞬時轉染產生的反式 1試劑對DNA比率（體積：IT-PRO®轉染試劑（Mirus公司Bio公司）以1： wt和1 µg質粒DNA每毫升培養在CHOgro®表達培養基（Mirus Bio）中的FreeStyle™CHO-S細胞（ThermoFisher Scientific）中，細胞密度為4 x 10 6細胞/ ml，或Expifectamine CHO轉染試劑盒（ThermoFisher Scientific），在ExpiCHO-S細胞（ThermoFisher Scientific）中每毫升培養物每毫升培養液的DNA含量為3.2：1試劑對DNA（vol：wt）和1 µg質粒DNA表達培養基（ThermoFisher Scientific），細胞密度為6 x 10 6細胞/毫升 在轉染時，將所有細胞分成125ml的生長燒瓶（25ml /瓶，Thomson Instrument Company）。添加轉染復合物后立即添加CHOgro®滴度增強劑，并將培養物在32°C搖動下孵育，直至收獲CHOgro®高產量表達系統。ExpiCHO表達系統（ThermoFisher Scientific）遵循大滴度規程：轉染后24小時加入Expifectamine CHO增強劑和飼料（ThermoFisher Scientific），并將培養物移至32°C。在第5天，將第二體積的ExpiCHO進料（ThermoFisher Scientific）添加到燒瓶中。使用標準夾心人IgG ELISA分析第7天和第14天的上清液。誤差棒代表一式三份技術重復的標準偏差。
在CHOgro®表達培養基中生長的FreeStyle™CHO-S和ExpiCHO細胞產生相似的滴度。
在CHOgro®表達培養基（Mirus Bio）中培養FreeStyle™CHO-S細胞（ThermoFisher Scientific）或ExpiCHO-S細胞（ThermoFisher Scientific）。兩種細胞系中瞬時與編碼人IgG1內部對照抗體的質粒DNA轉染的，貝伐單抗或使用Fc融合構建體反式 IT-PRO®轉染試劑（Mirus公司Bio公司）以1：1的試劑對DNA比率（體積：在未經處理的6孔板中，每毫升培養液含有1 wt g DNA和1 µg質粒DNA。將所有培養物移至32°C，搖動，然后將轉染復合物和CHOgro®Titer Enhancer添加到培養物中。使用標準夾心人IgG ELISA分析第14天的上清液。誤差棒代表一式三份技術重復的標準偏差。
CHOgro®滴度增強劑不會對轉染后的細胞生長和活力產生不利影響。FreeStyle™CHO-S細胞的一式三份培養瓶適于CHOgro®表達培養基與瞬時轉染跨 IT-PRO®轉染試劑（Mirus公司Bio公司）以1：1的試劑對DNA比率（體積：重量）和1μg每毫升培養物的質粒DNA為4 x 10 6在125毫升Optimum Growth燒瓶（25毫升/瓶，湯姆森儀器公司）中的細胞數/毫升。如所示，添加了CHOgro®Titer Enhancer，并且在將轉染復合物添加到培養液后立即將所有培養液轉移至32°C。轉染后每天使用Guava®easyCyte™5HT流式細胞儀（EMD Millipore）測量細胞計數（實線）和生存力（碘化丙啶染色，虛線）。
CHOgro®高產量表達系統可擴展1000倍。 人IgG1是通過用瞬時轉染產生的 反式 1試劑：DNA比IT-PRO®轉染試劑（Mirus公司Bio制）和每毫升培養液1微克質粒DNA在1。Freestyle CHO細胞（Thermo Fisher Scientific）以4 x 10 6的密度轉染 在以下體積/培養容器中的CHOgro®表達培養基（Mirus Bio）中的細胞數/ ml：2 ml /非組織培養物處理過的6孔培養皿，20 ml / 125 ml Thomson燒瓶，500 ml / 1.6 L Thomson燒瓶，2000 ml / 5 L湯姆森燒瓶。將所有培養物移至32°C，搖動，然后將轉染復合物和CHOgro®Titer Enhancer添加到培養物中。在其余的實驗中，將培養物保持在適當的搖動速度下。使用標準夾心人IgG ELISA分析第14天的上清液。誤差棒代表一式三份技術重復的標準偏差。
使用多個Fc融合構建體觀察到效價增強。使用兩種不同的Fc融合構建體瞬時轉染跨每毫升培養液：（重量體積）和1μg的質粒DNA試劑1到DNA比：以1 IT-PRO®轉染試劑（Mirus公司Bio公司）。將FreeStyle™CHO-S（ThermoFisher Scientific）細胞培養在CHOgro®表達培養基（Mirus Bio）中，并以4 x 10 6接種在未處理的6孔板中轉染時的細胞數/ ml（2 ml /孔）。如所指示的，添加了CHOgro®滴度增強劑，并且在將轉染復合物添加至培養物后立即將培養物轉移至32℃。使用標準的夾心人IgG ELISA分析第10天的上清液。誤差棒代表一式三份技術重復的標準偏差。
第三方使用CHOgro®高產量表達系統和CHOgro®滴度增強劑實現的更高滴度。Fc融合蛋白通過在完整CHOgro®媒體CHO-S細胞的瞬時轉染產生的使用反式（1:1試劑：DNA比率，體積：重量1）IT-PRO®轉染試劑。用于轉染的細胞為2 x 10 6細胞/ ml（無CHOgro®Titer Enhancer）或4 x 10 6（含CHOgro®Titer Enhancer）。轉染后24小時（無CHOgro®滴度增強劑）或立即（有CHOgro®滴度增強劑）將培養物轉移至32°C。產量代表轉染后第11天收獲的0.5 L培養物中的終親和純化蛋白。
反式 IT-PRO®+CHOgro®滴度增強性能優于PEImax和線性25kDa的PEI轉染試劑。 的IgG1抗體構建體通過使用瞬時轉染產生的反式 1試劑對DNA比率（體積：重量），PEImax（4：1，Polysciences公司），或IT-PRO®轉染試劑（Mirus公司Bio公司）以1在CHOgro®表達培養基（Mirus Bio）中以4 x 10 6的細胞密度培養的FreeStyle™CHO-S細胞（ThermoFisher Scientific）中每毫升培養液中線性25 kDa PEI（6：1，Polysciences）和1 µg質粒DNA細胞/毫升 添加轉染復合物后立即添加滴定增強劑（CHORUS®Titer Enhancer）（Mirus Bio），將培養物在32°C振搖下孵育，直至收獲所有試劑。使用標準夾心人IgG ELISA分析第14天的上清液。誤差棒代表一式三份技術重復的標準偏差。
儲存條件：
所有配置：多種儲存條件-有關具體建議，請參見各個瓶子。
產品保證：
所有配置：如產品組件上的標簽所示
完整協議
CHOgro®高產量表達系統完整方案（PDF）
快速參考協議
CHOgro®復合物形成溶液QRP （PDF）
CHOgro®表達培養基QRP （PDF）
CHOgro®轉染和滴度增強試劑盒QRP （PDF）
產品數據表
L-谷氨酰胺產品數據表（PDF）
泊洛沙姆188產品數據表（PDF）
安全數據表
CHOgro®表達培養基SDS （PDF）
CHOgro®高產表達系統SDS （PDF）
CHOgro®轉染和滴度增強套件SDS （PDF）
L-谷氨酰胺的解決方案SDS （PDF）
泊洛沙姆188溶液SDS （PDF）
跨 IT-PRO®轉染試劑SDS （PDF）
