TGR BioSciences Pty Ltd（TGR）是一家位于澳大利亞阿德萊德的私營(yíng)公司。TGR成立于2001年，致力于為基于細(xì)胞的研究應(yīng)用提供創(chuàng)新解決方案。我們的科學(xué)家擁有細(xì)胞生物學(xué)，生物化學(xué)和免疫測(cè)定設(shè)計(jì)方面的專業(yè)知識(shí)，并開發(fā)出高質(zhì)量的產(chǎn)品和服務(wù)，這些產(chǎn)品和服務(wù)已成功應(yīng)用于世界各地的藥物發(fā)現(xiàn)計(jì)劃。
TGR在其研發(fā)方面投入了大量資金，我們通過(guò)不斷提供新的細(xì)胞檢測(cè)方法來(lái)支持客戶的研究工作，以檢測(cè)疾病所依賴的細(xì)胞過(guò)程。TGR致力于營(yíng)造持續(xù)學(xué)習(xí)和改進(jìn)的氛圍，以及高質(zhì)量的技術(shù)支持，為我們的客戶提供性能的產(chǎn)品。
為此，TGR憑借其獲得專項(xiàng)的CaptSure™技術(shù)為其核心產(chǎn)品奠定了基礎(chǔ)。這種創(chuàng)新的抗體固定系統(tǒng)提供了更快速，更簡(jiǎn)單的免疫測(cè)定，以及顯著降低制造成本的好處。此外，我們開發(fā)了CaptSure™Multiplex，用于分析單個(gè)樣品中的多個(gè)目標(biāo)。除了在自己的產(chǎn)品中使用CaptSure™之外，TGR還與其他公司合作，根據(jù)許可安排訪問(wèn)該技術(shù)。
我們的旗艦免疫檢測(cè)系列SureFire®是一系列用于分析細(xì)胞磷蛋白的檢測(cè)試劑盒，由我們位于阿德萊德的工廠生產(chǎn)。SureFire和SureFire Ultra試劑盒通過(guò)PerkinElmer，Inc。（美國(guó)）分銷，PerkinElmer，Inc。是實(shí)驗(yàn)室試劑的市場(chǎng)領(lǐng)先者。SureFire和SureFire Ultra檢測(cè)器目前提供100多種SureFire試劑盒，可提供的工具箱，用于以均質(zhì)形式測(cè)量?jī)?nèi)源性信號(hào)蛋白。
TGR的ELISAONE™是一種高靈敏度的免疫分析技術(shù)，無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)ELISA應(yīng)用所需的所有處理步驟即可提供快速結(jié)果。ELISAONE還為該平臺(tái)帶來(lái)了靈活性，允許用戶使用標(biāo)準(zhǔn)讀板器在單個(gè)96孔板上測(cè)量多個(gè)靶標(biāo)。ELISAONE代表ELISA技術(shù)的下一代產(chǎn)品，現(xiàn)已通過(guò)我們的分銷合作伙伴在美國(guó)和加拿大銷售。
與PerkinElmer合作，我們自豪地推出AlphaSureFire®Ultra™ Multiplex檢測(cè)產(chǎn)品組合，這是僅可用的磷脂蛋白多路檢測(cè)平臺(tái)，具有真正的同質(zhì)性和高通量。雖然初的多重測(cè)定引入（MPSU試劑盒）僅??包括用于測(cè)量磷酸化和總ERK或AKT蛋白的幾個(gè)試劑盒，但是多重化試劑組的新添加允許從銪和一組銪中選擇單個(gè)磷酸化靶標(biāo)。基于鋱的單獨(dú)試劑并根據(jù)需要組合。這種拾取和包裝功能允許科學(xué)家選擇感興趣的雙重目標(biāo)，以便在實(shí)驗(yàn)室中輕松實(shí)施。
Alpha SureFire Ultra Multiplex檢測(cè)分為兩類（1）Multiplex SureFire Ultra（MPSU）試劑盒和（2）Terbium SureFire Ultra（TBSU）試劑盒。MPSU試劑盒是用于磷酸化和*檢測(cè)相同靶標(biāo)的完整試劑盒，而TBSU試劑盒測(cè)量單個(gè)磷蛋白靶標(biāo)，并且旨在與標(biāo)準(zhǔn)AlphaLISA SureFire Ultra試劑盒（ALSU）組合以評(píng)估第二個(gè)靶標(biāo)。TBSU試劑盒允許在測(cè)定列表中對(duì)任何兩種磷蛋白靶標(biāo)進(jìn)行拾取和包裝組合，提供兩種獨(dú)立靶標(biāo)的測(cè)量，具有大的選擇靈活性。TBSU試劑盒將通過(guò)鋱（Tb）受體珠報(bào)告目標(biāo)，而ALSU試劑盒通過(guò)銪（Eu）AlphaLISA受體珠報(bào)告。
阿爾法 神火 ® 超 ™多重磷酸+總測(cè)定試劑盒和磷酸+磷酸測(cè)定試劑盒（剛剛發(fā)布）允許快速，靈敏，和定量地檢測(cè)從細(xì)胞中磷酸化的，具有相同的蛋白質(zhì)或總量的測(cè)量組合第二種磷蛋白。該Alpha Multiplex測(cè)量在相同的測(cè)定板孔中從單個(gè)細(xì)胞裂解物樣品中進(jìn)行，并且通過(guò)使用兩種類型的Alpha受體珠實(shí)現(xiàn)，所述Alpha受體珠在不同波長(zhǎng)（545nm和615nm）發(fā)射。
如下所示，兩種不同的Alpha受體珠通過(guò)與特異性測(cè)定抗體的結(jié)合報(bào)告它們與不同抗原的結(jié)合。
單個(gè)目標(biāo) - Phospho + Total Assay試劑盒（MPSU試劑盒）
Alpha 615（銪）受體珠與靶蛋白上磷酸化位點(diǎn)的抗體直接綴合。Alpha 545（鋱）受體珠子涂有Capt Sure™ 試劑，該試劑結(jié)合Capt Sure 標(biāo)記的抗總靶蛋白抗體。Alpha供體珠結(jié)合生物素化的抗總靶蛋白抗體。
雙靶分析試劑盒（將ALSU試劑盒與TBSU試劑盒結(jié)合使用）
ALSU試劑盒中的Alpha 615（銪）受體珠與Capt Sure TM 試劑抗體綴合至靶蛋白上的位點(diǎn)。TBSU試劑盒中的Alpha 545（鋱）受體珠用新開發(fā)的Capt Sure2試劑抗體包被，該抗體結(jié)合 第二靶蛋白的Capt Sure2標(biāo)記的抗靶抗體。Alpha供體珠子結(jié)合靶蛋白質(zhì)1和2的兩種生物素化抗體。
在存在靶蛋白的情況下，抗體使供體和受體珠子緊密接近，使得能夠通過(guò)具有Alpha功能的讀板器照射供體珠子時(shí)產(chǎn)生α信號(hào)。光發(fā)射量與樣品中存在的目標(biāo)蛋白質(zhì)的量成正比。
Alpha技術(shù)消除了對(duì)費(fèi)力技術(shù)的需求，例如Western印跡或常規(guī)ELISA。它是一種無(wú)需洗滌步驟的均相分析，結(jié)合較短的孵育時(shí)間和出色的重現(xiàn)性（較低的CV％），非常適合機(jī)器人自動(dòng)化。
該測(cè)定法使用基于珠子的Alpha技術(shù)，并且需要能夠讀取雙發(fā)射波長(zhǎng)的Alpha技術(shù)兼容的讀板器。
測(cè)量磷酸和總蛋白質(zhì)目標(biāo)：
用于測(cè)量磷酸+總ERK和磷酸+總AKT的MPSU試劑盒現(xiàn)已上市。這些試劑盒包含進(jìn)行測(cè)定的所有試劑。
兩種磷蛋白靶標(biāo)的測(cè)量：
將ALSU套件與TBSU套件組合使用
ALSU試劑盒和TBSU試劑盒分別購(gòu)買特定的磷酸化靶標(biāo)，并結(jié)合測(cè)量所需的duoplex組合。TBSU試劑盒手冊(cè)中提供了試劑盒組合的方案。
因此，可以選擇超過(guò)900種可能的雙磷蛋白組合用于該靈活系統(tǒng)的測(cè)量。這在下圖中示意性地示出。
請(qǐng)聯(lián)系PerkinElmer獲取化驗(yàn)盒詳細(xì)信息，AlphaPlex讀數(shù)的讀板優(yōu)化以及當(dāng)前套件組合的完整詳細(xì)信息。
資源
示例數(shù)據(jù) - MPSU套件
同時(shí)測(cè)量每個(gè)孔中的p-AKT（Ser473）和總AKT
將MCF-7細(xì)胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過(guò)夜。然后用MEM + 1％FBS中不同濃度的渥曼青霉素處理細(xì)胞2小時(shí)，然后用2.5mg / mL胰島素刺激30分鐘（每種條件n = 3）。將每個(gè)孔在100mL SureFire Ultra 裂解緩沖液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra Multiplex試劑盒同時(shí)測(cè)定10μL等分試樣的每種裂解物的p-AKT 1/2/3（Ser473）和總AKT1 。
同時(shí)測(cè)量每個(gè)孔中的p-ERK和總ERK
將A431細(xì)胞以200K / mL在200mL MEM + 10％FCS中鋪板過(guò)夜。然后將細(xì)胞血清饑餓2小時(shí)，然后用不同濃度的EGF刺激10分鐘（每種條件n = 3）。將每個(gè)孔在100mL SureFire Ultra 裂解緩沖液中裂解，并使用Alpha SureFire Ultra Multiplex試劑盒同時(shí)測(cè)定10μL等分試樣的每種裂解物的p-ERK和總ERK 。
示例數(shù)據(jù) - 將ALSU套件與TBSU套件組合使用
雙磷蛋白檢測(cè)
用抑制劑處理后A431細(xì)胞中MEK1和ERK磷酸化的多重分析。 在用抑制劑處理然后刺激后，使用標(biāo)準(zhǔn)ALSU測(cè)定試劑盒測(cè)量磷酸化MEK1的水平，同時(shí)使用TBSU測(cè)定試劑盒測(cè)量磷酸化ERK水平。
MCF-7細(xì)胞中蛋白質(zhì)磷酸化的多重分析。用mTOR抑制劑雷帕霉素處理細(xì)胞，然后用胰島素刺激。通過(guò)ALSU和通過(guò)TBSU測(cè)量的p-AKT 1/2/3（Ser473）水平測(cè)量p-p70S6k（Thr389）的水平。
HeLa細(xì)胞蛋白磷酸化多重分析及總Cofiin標(biāo)準(zhǔn)化。
用EGF受體抑制劑AG1478預(yù)處理或不用EGF處理HeLa細(xì)胞。除去培養(yǎng)基，用1X SureFire Ultra裂解緩沖液裂解細(xì)胞。通過(guò)將用于p-ERK 的AlphaLISA SureFire Ultra（ALSU）測(cè)定試劑盒和用于Total Cofilin 的Terbium SureFire Ultra（TBSU）測(cè)定試劑盒組合制備多重受體混合物。
已經(jīng)開發(fā)出Total Cofilin TBSU試劑盒，以允許使用ALSU試劑盒測(cè)量的所有磷蛋白靶標(biāo)分析的duoplexed標(biāo)準(zhǔn)化。
TBSU檢測(cè)試劑盒清單
AlphaScreen SureFire STAT3 (p-Tyr705) Assay Kit
Phospho-SYK (Tyr525/526) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
Phospho-SMAD3 (Ser423/425) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
Phospho-p70 S6K (Thr389) Terbium SureFire Ultra Detection Kit
上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商
1：強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力，血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。
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5：多年積累良好的信譽(yù)，大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、國(guó)藥、fisher等知藥企。
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